以酵母菌雙雜交系統鑑定與 BIG1 相互作用的蛋白質

Translated title of the thesis: Identification of BIG1-interacting proteins by yeast two-hybrid assays
  • 高 詠晟

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

小分子鳥糞嘌呤核?酸結合蛋白質 (small GTPase) 腺嘌呤核?二磷酸核 糖化因子 (ADP-ribosylation factors; Arfs)是一個約 20-kDa 的蛋白質,Arf 主要負責調控並參與胞內囊泡運輸的路徑,Arf 如同 Small GTPase 能夠被他們的調控蛋白質鳥糞嘌呤核?酸交換因子 (guanine nucleotide-exchange factors GEF)上的 Sec7 ?能域催活,使得失活態的 Arf (結合 GDP)轉換為活化態的 Arf (轉為結合 GTP)。鳥糞嘌呤核?酸交換因子 BIG1 和 BIG2 (brefeldin A-inhibited guanine nucleotide-exchange factors BIG),最初是在小牛腦組織內約 670 kDa 的蛋白質複合物中被發現的,在 BIG1 和 BIG2 主要負責催活 Arf 的 Sec7 ?能域上有著高達 90%的 identity,除了 Sec7 ?能域外,其他幾個在 N 端及 C 端的保守?能域的?能都鮮為人知。因此,我們透過酵母菌雙雜交系統,並利用BIG1NSec7 (a a 1-885 包含 Sec7 domain) and BIG1C (a a 886-1849)當作誘餌蛋白質與人類胚胎大腦 cDNA 庫進行交互作用的篩選。本實驗發現了多個候選蛋白質,包括了微管相聯蛋白質 1B ( microtubule-associated protein 1B MAP1B)的輕鏈(light chain 1 LC1)與 ?-tubulin 等和微管組成相關的蛋白質;進一步利用酵母菌雜交研究出 MAP1B-LC1、?-tubulin 與 BIG1 交互作用的胺基酸序列,MAP1B-LC1與BIG1的Sec7?能域有專一性的交互作用,而?-tubulin與BIG1N端片段有交互作用,與 Sec7 域則無。微管結構的組成中,?-tubulin 便是其主要的聚合物之一,而 MAP1B 也多次被研究發現與微管的發展、穩定相關,並在神經細胞的軸突發育延伸、神經細胞遷移扮演重要角色。我們希望能透過這些新的交互作用的發現,在未來能更加明白 BIG1 如何調控廣範圍、長距離的胞內運輸等生理機制。
Date of Award2015 Dec 21
Original languageChinese
SupervisorChun-Chun Li (Supervisor)

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