利用原子力顯微鏡辨識突變PSGL-1及外鞘膜蛋白之間專一性結合力

Translated title of the thesis: AFM applied for specific bonding-force recognition between mutated PSGL-1 and EV71 viral envelope
  • 陳 重谷

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

近幾年在亞洲地區流行的腸病毒71型(EV71)是一種生長於腸道的RNA病毒,是一種手足口症(hand-foot-mouth disease,HFMD),這類感染病出現神經系統的病徵如抽蓄、肢體麻痺、腦膜炎及呼吸困難等症狀。有些研究已經指出EV71的受體P-selectin glycoprotein ligand-1 (PSGL-1)一旦硫化之後確實和EV71的結合能力會增加,但是在PSGL-1的序列當中,能夠被硫酸化和EV71結合的酪氨酸(Tyrosine Y)有三個(酪氨酸-46 48 51),目前推測此三個位置可能在硫酸化後和EV71的反應能力會有所不同。為了探討這三個酪氨酸對外鞘膜蛋白VP1的結合能力,本研究將使用苯丙胺酸(Phenylanine F)取代酪氨酸。本研究使用原子力顯微鏡(Atomic Force Microscopy AFM)作為量測EV71的外鞘膜蛋白VP1和PSGL-1之間解離力的工具,使用自組裝單分子層製程,VP1和突變的PSGL-1蛋白便可以分別固定於AFM探針以及矽基板之上,在使用原子力顯微鏡在緩衝液中量測兩種蛋白質的解離力。不論是抗體還是VP1的量測結果可知硫酸化的PSGL-1 (46 48F)的解離力明顯大於硫酸化PSGL-1 (48 51F)以及硫酸化PSGL-1 (46 51F)。此結果指出當酪胺酸-51被苯丙胺酸取代而無法硫酸化時會使得硫酸化PSGL-1和VP1的反應性明顯下降,證實酪氨酸-51是最重要的因為只要能組止它被硫酸化,便可以減少PSGL-1和腸病毒71的反應性。原子力顯微鏡能夠利用力學曲線可以分辨突變PSGL-1的反應性,所以適合量測這種與EV71相關的研究。
Date of Award2014 Aug 20
Original languageChinese
SupervisorJiunn-Der Liao (Supervisor)

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