泛素(Ubiquitin)是一種廣泛存在於真核細胞中的蛋白質。它藉由泛素化作用(Ubiquitination)的路徑所催化，接在特定蛋白質上，調控多種生理?能，例如DNA修復、激?的活化，以及抗病毒作用。?多文獻指出，細胞中泛素化程度的改變會引發病理反應，尤其是癌細胞的惡化。歸納目前研究，在人類中僅有兩種E1酵素，相對於具有多種類型的E2、E3酵素，選擇其一當作標的，更能廣泛地探討泛素化路徑對於癌細胞惡化的影響。本研究藉由RNA干擾(RNA interference RNAi)的方式，在多種癌細胞中(HeLa、H1299、MDA-MB-231、PC3)穩定抑制泛素活化酵素1(Ubiquitin-activating enzyme E1 UBE 1)的表現。實驗結果顯示，缺乏泛素活化酵素1表現，不論增生或爬行的能力皆顯著下降。透過西方墨點法(Western blot)分析，該細胞株中多種細胞週期相關蛋白，例如Cyclin B1、Cdc 2，以及Cyclin D1表現量下降；而對於細胞生長極為重要的NF-κB 訊息傳遞路徑，原本經由泛素化-蛋白?體系統降解的IκB表現量提升，位於下游的活化態NF-κB則顯著下降。此外，細胞週期分析則可觀察該細胞株在相同時間點下，位於G1期的細胞數量較對照組低。為了更進一步了解缺乏此酵素對於癌細胞的影響，我利用不同化療藥物：2-去氧葡萄糖(2-Deoxyglucose 2-DG)、每福敏(Metformin)、依托泊?(Etoposide)分別處理細胞株。結果顯示處理2-DG對於UBE1穩定靜默株的毒殺能力最強。在使用4 mM濃度下，該細胞株即大量死亡。經由流式細胞儀分析，不論處理何種濃度的2-DG，UBE1穩定靜默株進入細胞凋亡的數量，都會顯著上升。綜合以上結果，在多種癌細胞中，抑制泛素活化酵素1的表現，會降低其惡性程度，並且可能透過NF-κB 訊息傳遞路徑的變化，使增生速度減緩。此外，該細胞株對2-DG的敏感度增加，提供合併藥物治療的方向。
| Date of Award | 2015 Aug 26 |
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| Original language | Chinese |
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| Supervisor | Wen-Tsan Chang (Supervisor) |
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惡性腫瘤細胞的泛素活化酵素1缺失會增加對2-去氧葡萄糖的敏感性
彥圻, 陳. (Author). 2015 Aug 26
Student thesis: Master's Thesis