探討一個新的胚胎腫瘤幹細胞標記

Translated title of the thesis: Study of a novel oncofetal tumor-stem-cell marker
  • 林 珮雯

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

腫瘤胚胎基因(Oncofetal Gene)是指在胚胎發育時期高度表現之基因,隨著個體年齡增長,其表現量降低或是不被表現。然而當個體患有惡性腫瘤時,腫瘤胚胎基因會再度被活化表達,而此一特性在臨床上能做為偵測癌症發生以及復發的指標。實驗室在先前已建立一套生物資訊系統,從表達序列標記片段(EST)資料庫中,尋找腫瘤胚胎候選基因,再藉由RT-PCR方式初步篩選出具有腫瘤胚胎表現型(Oncofetal Phenotype)基因進行研究。利用此生物資訊系統找出之Lin28B,已被證實為一個良好的循環腫瘤胚胎幹細胞標記(Circulating oncofetal tumor-stem-cell-like marker),可辨識臨床檢體是否具有腫瘤幹細胞(Tumor stem cell),並能針對病患進行轉移性復發及預後風險評估。 從上述生物資訊系統中找出另一個具有潛力之基因─C11orf41。C11orf41是一個已知核?酸序列但生物?能未知的基因,經RT-PCR方式初步篩選後,發現在大多數腫瘤細胞株中均有表現,但僅在部分正常組織(胚胎時期腦部組織、成人腦部組織、睪丸和脊椎)中被偵測到,而在腫瘤-非腫瘤組織配對檢體中也有相似的結果,因此證實C11orf41為一個腫瘤胚胎基因。另外,在誘導性多?能幹細胞(iPS)及富有EpCAM (Stem Cell marker)之肝癌細胞中也能偵測到C11orf41的表現,進而提出C11orf41是一個具有潛力之腫瘤胚胎幹細胞標記的假設。 本篇研究首先構築C11orf41與EGFP及Myc epitope的融合蛋白,以反轉錄病毒感染方式建立Over-expressed C11orf41穩定細胞株,再藉由西方點墨法確認C11orf41蛋白質表現,並利用共軛焦顯微影像系統發現C11orf41會在細胞質中形成聚集蛋白(Aggregate Protein)。另外也建構了7 個C11orf41的截短蛋白(Truncated Protein)分別與EGFP及Myc epitope進行融合,以共軛焦顯微影像系統觀察,其中C11orf41(4519-5547b p)和C11orf41(3988-5547b p)在細胞核內會有聚集蛋白的形成。證明在C11orf41蛋白質C’端序列上除了具有聚集結構之外,可能還存在著核定位序列(NLS),有助於C11orf41進入細胞核內參與基因之調控。因此,認為C11orf41可能是一個具有?能之蛋白質,但實際參與的作用機制仍待後續研究解謎。
Date of Award2016 Aug 30
Original languageChinese
SupervisorChung-Liang Ho (Supervisor)

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探討一個新的胚胎腫瘤幹細胞標記
珮雯, 林. (Author). 2016 Aug 30

Student thesis: Master's Thesis