探討困難梭狀桿菌潛力附著素Csp1之分子特性

Abstract

困難梭狀桿菌 (Clostridium difficile)是一種會產生內孢子的革蘭氏陽性、人類致病菌，通常與抗生素所造成的腹瀉相關。原本存在宿主腸道中的正常菌叢會因為施用廣效性抗生素而被破壞，這是導致困難梭狀桿菌感染 (CDI)的一個主要原因。在北美與?多的歐洲國家，高致病性菌株的出現以及高致死率，是導致CDI愈來愈嚴重。造成CDI相關症狀的主因為TcdA和TcdB兩種毒素，而在某些菌株中會表現二元體毒素CDT；另外，困難梭狀桿菌會表現非常多種表面蛋白，如S層蛋白 (S-layer proteins)、纖維黏連蛋白 (fibronectin-binding proteins) 和細胞壁蛋白 (Cwps)。目前已知革蘭氏陽性菌的表面蛋白在感染中扮演重要的角色，而分選?是一種表現在細胞膜上的轉??，會促進細胞表面蛋白共價鍵結至細胞壁。為了找出分選?依賴性的表面蛋白在困難梭狀桿菌致病機制中所扮演的角色，透過生物資訊學分析找出困難梭狀桿菌630菌株中至少7種具有潛力的分選?受質。在本研究中，我針對其中由CD2831所編碼的一種長度為972個胺基酸、有膠原蛋白結合?能的潛力細胞表面蛋白Csp1作為主要研究對象，此蛋白的PPKTG多胜?顯示其可能為困難梭狀桿菌分選?B的潛在受質。本研究的目的為探討Csp1的分子特性，建構了csp1插入性突變株KYC01，藉由Csp1多株抗體以免疫墨點分析法來確定Csp1的表現位置，但由於Csp1的低表現量，我在野生株與突變株大量表達Csp1，之後透過細胞分層實驗與免疫墨點法分析證明Csp1可以錨定在細胞壁上，有趣的是Csp1表達位置，主要在培養液中。以體外結合試驗，證明Csp1重組蛋白具有與膠原蛋白第一型結合的能力。由以上結果可以推論Csp1為困難梭狀桿菌潛力黏著素。

Date of Award	2014 Jan 29
Original language	Chinese
Supervisor	I-Hsiu Huang (Supervisor)