探討cAMP和ROS對於PMA誘導人類血癌細胞模型的細胞分化為巨核細胞之影響研究

Abstract

血小板主要是經由巨核細胞的分化所生成，而巨核細胞的分化過程稱為Megakaryocytopoiesis。在不正常的巨核細胞分化過程會導致一些疾病的發生，如原發性血小板增多症(Essential thrombocythemia)與血小板低下症(Thrombocytopenia)，這些類型的病患骨髓中會有異常增多或減少的巨核細胞或血小板。因此，研究巨核細胞的分化過程是有其必要性的。過去已知利用人類血癌細胞株 HEL和K562在PMA誘導下，會抑制細胞的增生而使細胞變大、增加染色體套數以及細胞表面抗原CD41/61的表達等巨核細胞分化時的特徵。且過去研究指出，ROS會參與在巨核細胞分化中，並且會增加表面抗原CD41/61的表達;而先前實驗室也發現cAMP會阻止巨核細胞分化。所以在本研究中，利用HEL細胞作為本研究的實驗模型來探討cAMP和ROS產生的之間的關係，並利用腺?酸環化?(Adenylyl cyclase)的活化劑forskolin(FSK)前處理在HEL細胞中來觀察cAMP是如何去影響ROS的體內平衡導致去影響一系列的巨核細胞分化過程。首先利用流式細胞儀分析發現經由PMA處理後ROS中的superoxide (O2-) 和hydrogen peroxide (H2O2)呈現time-dependently的增加。有趣地是我們也發現當前處理forskolin後雖然會增加H2O2的表現量但卻也會減少O2-的表現量。另一方面在西方墨點法分析中我們觀察到經由PMA誘導下SOD2則會呈現time-dependently的減少，而當處理forskolin後其SOD2的蛋白質表現量有被恢復回來，但SOD1的蛋白質表現量卻不受影響。進一步我們使用了MEK1/2的抑制劑結果顯示會降低forskolin恢復SOD2的蛋白質表現量的能力，最後再用SOD activity assay方法也能觀察到當經由PMA誘導下SOD2?的活性被抑制而加入了forskolin後其活性有被恢復。因此，綜合上述所觀察到的結果，forskolin會直接通過活化MAPK的路徑來調控SOD2以及導致H2O2的增加。

Date of Award	2015 Aug 10
Original language	Chinese
Supervisor	Wai-Ming Kan (Supervisor)