探討IRSp53在大腸癌細胞增生和運動中所扮演的角色

Translated title of the thesis: Studying the role of IRSp53 in cell proliferation and motility in colorectal cancer cells
  • 李 易遐

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

先前研究發現IRSp53 (Insulin Receptor tyrosine kinase Substrate Protein of 53 kDa)為Eps8 (EGF receptor pathway substrate NO 8)的結合蛋白質,並且Eps8- IRSp53的結合會參與在v-Src細胞的轉型當中於是我們想進一步探討IRSp53是否會參與在大腸癌細胞的增生和運動過程中。目前已知IRSp53具有四種人類異構物 (IRSp53S IRSp53T IRSp58M and IRSp53L),然而對於這些異構物的?能尚未清楚,因此也想探討不同異構物在其中所扮演的角色。我們首先利用shRNA去抑制大腸癌細胞SW620中IRSp53的表現量,由實驗結果發現當降低IRSp53的表現量後,細胞生長情形有減緩的現象。此外,在SW620細胞中當降低IRSp53的表現量後,Pi-Y416 Src的表現量也跟著受到抑制。在WST-1 cell viability assay中,降低SW620細胞中IRSp53的表現量,可能增進其對化療藥物的化學敏感度,然而在wound healing assay結果發現,降低IRSp53蛋白表現量的SW620細胞株中其wound closure百分比相較於Ctrl細胞株並沒有顯著的差異。另一方面,我們也透過外送不同人類 IRSp53 異構物的質體進入IRSp53表達量少的SW480細胞中去觀察其對於細胞?能上的影響,由實驗結果發現到當外送Myc-tagged human IRSp53S和IRSp53S-YA mutant (缺乏C端與Eps8結合區域之序列)進入SW480細胞,Src,Pi-Y416 Src 和 Pi-Y861 FAK的表現量都有增加的現象,然而外送Myc-tagged human IRSp58M入SW480細胞,則沒有明顯變化。並且在外送IRSp53S入SW480細胞後,細胞生長速率有增加的趨勢,然而外送IRSp53S-YA mutant入SW480細胞,則沒有此現象。在wound healing assay結果發現,無論外送IRSp53S,IRSp53S-YA mutant以及IRSp58M皆使細胞移動爬行變慢,其中又以IRSp53S-YA mutant細胞株爬行速率最慢。因此我們認為IRSp53S可能參與在調控Src的活性以及影響相關細胞生長路徑,但是對於細胞的移動可能不是促進的角色。
Date of Award2014 Jul 30
Original languageChinese
SupervisorTzeng-Horng Leu (Supervisor)

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