橙黃壺菌L-BL10 品系 (Aurantiochytrium sp strain L-BL10) 為真核 微藻，其具有培養成本低廉、成長快速、以及具有無細胞壁世代 (阿米巴 細胞) 的優點，加上已完成初步的基因體分析，因此具有成為新一代真核 表現平台的潛力。 本研究的目的，即為建立L-BL10 外源性基因表現之轉 殖平台。首先，藉由L-BL10 的基因體資料庫預測基因序列之密碼子使用 偏性；同時取得延長因子的啟動子、基因及終止子序列，以作為起始及 終止外源基因轉錄的元件；其次，分別選用綠色螢光蛋白基因以及遺傳 黴素抗性基因-紐奧黴素磷酸轉移?II 基因，作為基因片匣中的報導基因 或篩選標誌；最後進行細胞轉化測試，搭配微脂粒或電穿孔法並測試以 不同微脂粒包覆核酸之比例或脈衝條件等。 本研究共統計16788 個密碼子使用偏性，其中UUA、CUA、AUA 以及 CGA 在對應於同胺基酸的密碼子中，其使用率小於1 %。在核酸構 築已完成延長因子啟動子、外源基因以及延長因子終止子等三個片段連 接成的基因片匣。最後，以電穿孔法及微脂粒法皆能成?將綠色螢光蛋 白基因組序列送入細胞中且能偵測到外源基因之mRNA，此外能在微脂 粒化轉細胞中觀察到具有綠色螢光訊號之藻細胞。
| Date of Award | 2014 Aug 29 |
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| Original language | Chinese |
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| Supervisor | Yi-Min Chen (Supervisor) |
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橙黃壺菌L-BL10 品系之基因轉殖平台建立
伯瑋, 翁. (Author). 2014 Aug 29
Student thesis: Master's Thesis