泛素特異性胜??二十四在DNA受損時所扮演角色之探討

Abstract

在一般的狀況下，細胞可能會遭遇到?多來自環境的壓力，包含放射線或是氧化壓力，導致DNA產生受損。DNA的受損可能導致細胞凋亡或是癌化的產生，因此細胞內部有?多種類的DNA修復蛋白以及訊息傳遞路徑在進行DNA的修復。然而，?多重要的DNA修復蛋白，例如RAD51也被發現與癌細胞的抗藥性產生有著重要的關聯性。所以研究細胞如何調控DNA修復蛋白的基因表達對於維持基因體穩定性以及避免癌症抗藥性的產生是一個重要的議題。我們實驗室先前的研究發現在肺腺癌細胞株A549當中抑制泛素特異性胜??USP24的基因表達會顯著增加RAD51這個在同源重組修復(homologous recombination repair; HR)當中扮演重要角色的蛋白質的表現。因此本篇研究想要釐清USP24是否可以藉由影響RAD51基因表達進而影響同源重組修復。我們發現在A549細胞當中抑制USP24的表達會促進RAD51的基因表達，然而在H1299細胞當中則無。經過文獻搜尋這兩細胞株的基因背景差異，我們懷疑抑癌基因p53有可能參與在USP24調控RAD51的訊息傳遞路徑當中。但是實驗結果顯示p53並沒有參與在USP24調控RAD51的訊息傳遞路徑當中。所以我們使用不同片段的RAD51啟動子透過報導基因測試(reporter assay)想要藉此找出USP24所影響的轉錄因子(transcription factor)可能結合在RAD51的啟動子上的位點。我們發現RAD51的啟動子上有一E2F轉錄因子家族結合的位點對於USP24調控RAD51基因表達扮演重要的角色。接著我們探討USP24是否可以透過調控RAD51的基因表達進而影響同源重組修復的能力與影響癌細胞抗藥性的產生。我們發現USP24會降低RAD51在DNA斷裂處形成foci的能力。同源重組修復試驗也發現USP24可以透過影響RAD51的表達進而降低同源重組修復的能力。最終，我們探討USP24是否可以藉由影響RAD51基因表達而影響癌細胞的抗藥性產生。透過細胞週期及細胞凋亡比例的分析與群落形成能力試驗(colony formation assay)，我們證實USP24可以藉由調控RAD51基因而增加癌細胞的抗藥性。總結我們的實驗結果發現，USP24可以藉由E2F家族的轉錄因子去調控RAD51的基因表達，更進一步影響同源重組修復的能力以及癌細胞抗藥性的產生，希望這個新發現能對於癌症治療產生新的策略。

Date of Award	2014 Jul 29
Original language	Chinese
Supervisor	Jan-Jong Hung (Supervisor)