液相質譜多反應監測法測定牛乳中類胰島素生長因子-1的含量

Translated title of the thesis: Quantitative detection of insulin-like growth factor-1 in raw milk by LC-MRM
  • 陳 思遙

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

胰島素樣生長因數-1 (insulin-like growth factors 簡稱IGF-1)是牛乳的天然成分之一。它是一種多?能的細胞增殖調節因數,同時過量的IGF-1攝入可能會打亂人體的正常的生理機能。近來有研究表明乳牛食用含有激素藥品的飼料會增加牛乳的產量,同時會使牛乳中的IGF-1含量提高。故需建立牛乳中IGF-1的定量檢測方法以確保牛乳的安全性。本文以多反應監測法(Multiple Reaction Monitoring MRM)為基礎,使用液相質譜對牛乳中的IGF-1進行定量檢測。IGF-1標準品進行胰蛋白?水解後進行液相質譜檢測,通過Mascot資料庫搜索得到完整的蛋白質生?圖譜。根據蛋白質體學的原則,總共從5個母離子中選擇了19對MRM離子對用於目標蛋白的定量。從濃度2 77-36 07pg/ul的標準曲線擬合R2值大於0 9。通過單一的MRM離子對,最低定量極限約2 77pg/ul。1-10ng IGF-1標準品被添加進牛乳樣品。標準添加的樣品使用鹽酸乙醇溶液純化,Gn-HCl 及 DTT進行蛋白變性、去雙硫鍵,IAM進行烷基化,胰蛋白?進行水解,然後進行液相質譜分析。鑒於牛乳中本身的IGF-1含量非常低,通過標準添加曲線,計算得回收率約64%。使用同樣的方法,計算得牛乳中IGF-1的含量約為1 14pg/ul,同時和?聯免疫吸附測定法(ELISA)獲得的結果進行比較。
Date of Award2014 Aug 25
Original languageChinese
SupervisorShu-Hui Chen (Supervisor)

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