藉由樹突細胞來探討六價鉻合併奈米微粒對免疫反應及過敏性接觸性皮膚炎之影響

Translated title of the thesis: Immune response and allergic contact dermatitis of chromium (VI) with nanoparticle on dendritic cells activation and function
  • 洪 時儀

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

過敏性接觸性皮膚炎是常見的職業病,其中以六價鉻金屬所導致的為最受注意,這些小分子量的金屬衍生物可被視為一種半抗原而具有致敏的潛力,對於六價鉻的職業暴露,主要途徑為空氣和皮膚的吸收,而另一方面隨著奈米材料應用多元在職業上暴露機會逐漸增加,其途徑也多是透過空氣和皮膚的接觸,因此本實驗目的在於利用樹突細胞的特殊成熟活化性質作為研究平台,以及建立過敏性接觸性皮膚炎動物模式,判定六價鉻所造成的過敏性接觸性皮膚炎是否因為合併奈米微粒而更加嚴重。細胞試驗方面,以MTS assay測量細胞的存活率,並以流式細胞儀分析由小鼠骨髓細胞成?分化為樹突細胞的比例,以及分析樹突細胞的成熟度,另外使用ELISA與RT-PCR測定相關細胞激素的表現,並利用免疫螢光染色觀察細胞自體吞噬現象,以西方墨點法分析相關蛋白的表現,另外也利用RT-PCR觀察TLRs的基因表現。動物試驗方面,建立過敏性接觸性皮膚炎動物模式,量測老鼠耳朵腫脹厚度,再利用組織切片染色觀察皮膚病理變化,以及免疫組織染色觀察細胞激素的變化,並利用局部淋巴結試驗觀察細胞增生情況以及樹突細胞遷移到淋巴結的比例。結果顯示,由小鼠骨髓細胞衍生分化為樹突細胞的比例約為70 %,接著給予樹突細胞不同劑量的六價鉻、奈米二氧化鈦和兩者合併的組別,24小時後觀察存活率,並配合成熟度的結果,最後選擇Cr+6 (150 nM)與TiO2–NP (25 μg/ml)的劑量作為實驗條件,而合併組的細胞激素TNF-?和IL-1β的表現量比起控制組有增加趨勢。由免疫螢光染色觀察合併組LC3的表現有增加,以及利用西方墨點法分析蛋白質的表現,也發現合併組的p62、LC3、Beclin-1、Atg5與TRAF6表現皆上升,利用RT-PCR也觀察到合併組的TLR4與TLR9的基因表現增加,最後利用3-MA將合併組的自體吞噬抑制,觀察細胞激素受到影響。動物實驗方面,合併組的老鼠耳朵厚度顯著大於控制組,由組織切片染色觀察得到合併組表皮層增厚以及細胞浸潤現象,並且有細胞激素釋出的情形。另外觀察到合併組的局部淋巴結重量增加,以及有細胞增生情況,同時偵測局部淋巴結內的樹突細胞比例也最高。根據目前結果顯示,六價鉻合併奈米二氧化鈦具有誘導樹突細胞活化成熟能力,並可能藉由活化TLR4與TLR9的訊息路徑,促使自體吞噬以及細胞激素產生,並進一步將抗原呈現活化T細胞,使過敏性接觸性皮膚炎症狀更為嚴重。
Date of Award2014 Feb 10
Original languageChinese
SupervisorYing-Jan Wang (Supervisor)

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