蛋白?體抑制劑Bortezomib增強口腔癌放射線治療敏感性

Translated title of the thesis: Bortezomib a proteasome inhibitor enhances radiosensitivity in oral cancer
  • 吳 玟萱

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

口腔鱗狀細胞癌是癌症中最常見的類型之一。大多數口腔癌患者早期有很好的生存率,但是晚期或復發的患者沒有更有效的治療效果。蛋白?體的主要作用是將接上泛素鏈的蛋白質分解,並且在人體中會調控細胞週期、細胞增生、細胞凋亡、血管新生、轉移、化療和放射治療的抗性;因此近年來有學者將蛋白?體抑制劑合併放射治療希望在癌症治療上有更好的效果。Bortezomib 是第一個批准用於臨床治療的蛋白?體抑制劑,目前可用於治療多發性骨髓癌。最近的研究指出,TRAF6 會調節 Akt 泛素化以及活化,並且 TRAF6 活化 NF-κB 的?徑在癌症發展中扮演重要的角色。先前研究也發現在口腔癌細胞中 TRAF6 和 NF-κB 有過度表現的現象。在目前的研究發現抗癌藥物會引起第一型(細胞凋亡)和第二型(自體吞噬)計畫性細胞死亡。本篇的研究目的是合併處理蛋白?體抑制劑 Bortezomib 與放射線在體外細胞實驗、動物實驗和分析臨床檢體,進一步分析其可能的相關作用機制。在體外試驗中利用 trypan blue 分析細胞存活率,並利用 CalcuSyn 軟體計算其 combination index (CI);以?式細胞儀分析細胞週期和早期細胞凋亡;西方墨點法?測定細胞凋亡和自體吞噬相關蛋白之表現?變化;蛋白質之間的交互作用及泛素作用使用免疫沉澱法分析。在動物實驗中,採用皮下異種移植模式,以量尺量測的方式觀察腫瘤生長的情形,並利用組織切片染色法觀察口腔癌的病理變化,最後利用免疫組織化學染色法和西方墨點法分析相關蛋白的表現量。此外,使用免疫組織化學染色法分析口腔癌病人和相對的正常組織檢體 TRAF6 的表現?。在體外試驗的結果顯示,我們利用人類口腔癌細胞株 SCC-9、SAS 與 SCC-25 在合併處理放射線與蛋白?抑制劑 Bortezomib 後,抑制效果較單獨處理藥物組別顯著,利用細胞群落分布實驗也發現合併處理的組別比單獨藥物組的細胞形成群落的數目更少,並且顯著提高自體吞噬與早期細胞凋亡的百分比。我們發現在 SAS 細胞中單獨處理放射線或 Bortezomib 與合併處理的組別明顯增加自體吞噬指標 p62 的表現,而在另一個自體吞噬指標 LC3-II 的表現量結果顯示單獨給予 Bortezomib 與合併處理的組別均有增加的情形。探討單獨處理放射線對於 SAS 細胞所誘發的相關機制以及合併處理Bortezomib 所造成的影響,從結果顯示 Bortezomib 可以明顯的抑制放射線所誘發 NFκB 的活化和口腔癌細胞存活能力。SAS 細胞在 Bortezomib 合併處理之下,TRAF6與磷酸化 Akt(T308) 的表現量都有顯著降低;進一步利用免疫沉澱法發現合併處理會降低 Akt 蛋白的多泛素化,除此之外我們可以發現蛋白?體抑制劑 Bortezomib 合併放射線治療口腔癌的機轉是透過增強 autophagy-dependent TRAF6 degradation。在口腔癌皮下異種移植動物模式,合併處理放射線與蛋白?體抑制劑Bortezomib 可有效抑制口腔腫瘤的生長,SAS 細胞在 Bortezomib 合併處理之下,TRAF6 和磷酸化 Akt(T308) 的表現量都有顯著降低。另外在 Knockdown SAS 細胞株的 TRAF6 基因動物模式中,也明顯的降低口腔腫瘤生長的體積,因此 TRAF6 可能會影響到腫瘤生長情形。此外,TRAF6 於4個隨機取樣的口腔鱗狀細胞癌臨床檢體中都有過度表現的現象,利用免疫組織化學染色法的結果也顯示 TRAF6 在人類口腔癌組織中有過度的表現。另外經由 Kaplan-Meier 生存分析結果顯示,有 TRAF6 表達的患者比沒有 TRAF6 表達的患者存活率相對較低。綜合以上結果可知,合併處理蛋白?體抑制劑可經由抑制 TRAF6 訊息傳遞路徑而誘發自體吞噬和細胞凋亡而增加放射線對於口腔癌細胞抗癌效果。
Date of Award2016 Feb 18
Original languageChinese
SupervisorYing-Jan Wang (Supervisor)

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蛋白?體抑制劑Bortezomib增強口腔癌放射線治療敏感性
玟萱, 吳. (Author). 2016 Feb 18

Student thesis: Master's Thesis