tmigd1基因單核?酸多型性之乾式生物檢測試紙系統

  • 林 志韋

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

免疫層析法是一種操作簡便、低成本、時間需求低的檢測技術,並已被廣泛的應用在各種的生物檢測應用上。近年來,此種方式已由原始之抗體-抗原檢測方式成?應用至基因檢測、甚至是Single Nucleotide Polymorphism (SNP)偵測。本論文探討免疫層析試紙之開發與相關製程條件之參數,並將成品應用於菜鴨之tmigd1基因之SNP檢驗上。 本論文選定奈米金粒子作為免疫層析試紙之顯色單元,並由試驗結果選定0 67M NaCl作為奈米金粒子表面單股核酸探針修飾之最終鹽度設定。在後續的試紙先行測試中,Streptavidin使用量在0 25μg下時將不會有肉眼可辨識之假陽性訊號產生,因此後續的試驗中將以此數值作為試紙參數調整之起始數值。 本論文中使用Primer Extension作為SNP辨識之核心機制,利用特定DNA聚合?不具有3’-5’外切性之特性,只有目標SNP存在時才能發生聚合反應並將Biotin-16-dUTP嵌入產物中。產物將因帶有Biotin而能夠被試紙上之Streptavidin所捕捉。在此反應中Mg2+離子濃度為影響試紙訊號特異性最主要因素,次之為試紙上Streptavidin之使用量。本論文選定1mM Mg2+搭配0 12μg Streptavidin作為最終的標準設定。且由試驗結果可知增加PCR產物使用量與Primer Extension反應循環次數均可有效得提升G/A genotype之信號強度,同時G/G與A/A genotype之信號特異性不會受到顯著的影響。本研究再額外使用6組DNA樣品以7個Primer Extension循環進行再現性驗證,由試驗結果可發現6組樣品均可得到預期中的訊噪對比,但特異性訊號強度會受到PCR產物濃度影響。最後根據計算,本檢驗方式之時間需求約為40分鐘、單位成本為38 5元新台幣。
Date of Award2016 Jul 4
LanguageChinese
SupervisorJui-Chao Kuo (Supervisor)

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tmigd1基因單核?酸多型性之乾式生物檢測試紙系統
志韋, 林. (Author). 2016 Jul 4

Student thesis: Master's Thesis