利用單鏈變異區片段平台篩選影響腸病毒A71型感染之抗體

人類腸病毒A71 型屬於微小病毒科腸病毒屬，為神經趨性之病毒，嬰幼兒感染後可能引發輕微至嚴重不同程度之症狀，常見的臨床症狀包含手足口症、皰疹性咽峽炎，嚴重可能導致腦幹腦炎、肺水腫或是其他神經相關病症。目前中國已有核可之腸病毒A71型之疫苗上市，但其基因型為C4，與台灣流行之基因型並不同，其保護效果有待研究。除此之外，臨床目前尚未有腸病毒A71 型專一性的抗病毒藥物，可以有效的抑制病毒感染。因此於本研究中，我們希望能找出新抗病毒療法或是輕重症生物標記 (biomarker)，以避免因病毒感染引發之重症疾病。我們將利用單鏈抗體 (single chain variable fragment, scFv)篩選抑制病毒複製或干擾病毒與細胞蛋白交互作用之平台，來篩選可能之單鏈抗體。首先，我們將自有較高抗腸病毒A71型抗體效價之健康自願者體內，取得周圍單核球細胞核酸，放大重鏈(heavy chain)及輕鏈(light chain)之可變區域(variable region)之基因序列，構築人源單鏈抗體資料庫，並將其表現於哺乳類細胞株中。經致死劑量病毒感染，從存活細胞中放大其表現的單鏈抗體基因。此外，我們將採用免疫酵素分析法之微量中和試驗(micro-neutralization ELISA)進行快速大量篩選，找到真正可以抑制病毒感染之候選者。接下來，我們將利用基因工程製作此單鏈抗體候選者，並重組成完整抗體，確認此單鍊抗體及其完整抗體具有抗病毒能力，最後我們將進行此單鏈抗體之特性分析，探討其抗病毒機制或功能上所扮演的角色，並研究此單鏈抗體如何影響病毒複製之機轉。單鏈抗體除了跟一般抗體一樣具有抗原專一性，在基因重組工程上更易操作，並且與小分子藥物相較起來，較不易引發病毒本身產生突變而出現抗藥性，可應用於臨床治療上，或是成為輕重症鑑別之生物標記。 在我們的研究中，第一年，我們將建立可對抗腸病毒A71型感染之單鏈抗體資料庫。我們將利用人類周邊血單核球細胞 (peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)表面與非表面之篩選平台尋找目標之單鏈抗體。第二年我們將探討此抗體之抗病毒作用，並利用質譜分析找到該抗體與之結合的目標蛋白。第三年我們將利用動物模式探討我們所找到之抗體與其目標蛋白對於腸病毒A71型病毒感染機制中所扮演的角色。