以小鼠模型、病人檢體及CRISPR/dCas9干擾性基因編輯工具研究細胞凋亡有關之長鏈非編碼核糖核酸於全身性紅斑狼瘡之角色

全身性紅斑性狼瘡患者主要的病態機制為過多的體內細胞發生凋亡且無法清除，伴隨產生之核內抗原進一步結合自體抗體形成免疫複合物，沉積於全身組織導致發炎反應。此計劃乃闡明長鏈非編碼核糖核酸於全身性紅斑性狼瘡細胞凋亡之角色，研究經由調控長鏈非編碼核糖核酸的表現來抑制細胞凋亡以減少自體抗原及免疫複合物形成。預實驗結果顯示lincRNA-p21伴演促進細胞凋亡之角色且其高表現量與狼瘡病人臨床上腎炎與肺出血之表現具正相關性。於Jurkat T細胞株產生凋亡過程發現lincRNA-p21表現增加，miR-181a為其競爭內源微型核糖核酸，而IL-2 為標靶蛋白。已建立Balb/c與C57BL/6兩種狼瘡小鼠模型，前者表現顯著腎炎而後者產生肺出血。此長期計劃的方向將以小鼠模型、病人檢體及CRISPR/dCas9干擾性基因編輯工具研究細胞凋亡相關之長鏈非編碼核糖核酸於全身性紅斑狼瘡之角色。第一年以病人週邊血單核白血球以微陣列晶片分析篩選出其他特定異常表現與細胞凋亡相關之長鏈非編碼核糖核酸，以即時定量聚合酶連鎖反應來分析血液及尿液細胞進行篩選。再以即時定量聚合酶連鎖反應/螢光素酶表達分析找出長鏈非編碼核糖核酸相關路徑軸之內源微型核糖核酸，及研究其標靶蛋白。第二年以腹腔注射pristane誘導兩種狼瘡模型包括Balb/c與C57BL/6小鼠。以即時定量聚合酶連鎖反應分析其腎、肺與脾臟中由病人所篩選出長鏈非編碼核糖核酸之量，找出病人與小鼠均具相同上調表現的核糖核酸。設計單一導向核糖核酸以已找出之特定人類及小鼠之長鏈非編碼核糖核酸為標靶，構築攜帶此單一導向核糖核酸之干擾性基因編輯載體，再以穩定的HEK-293人類及Raw 264.7小鼠細胞之轉殖株來篩選。第三年進行小鼠之生體實驗以靜脈注射攜帶單一導向核糖核酸之干擾性基因編輯載體，其長鏈非編碼核糖核酸表現將以即時定量聚合酶連鎖反應與原位雜合法來檢查。Balb/c小鼠將檢查血液中抗體及尿液中蛋白尿量至8個月，其摘除之腎臟進行組織學檢查。而C57BL/6小鼠將檢查血液中血色素與抗體至4個月，而瀕死之小鼠摘除之肺臟將進行組織學檢查。這些小鼠之脾臟細胞將進行凋亡分析，且一併檢查長鏈非編碼核糖核酸之競爭內源微型核糖核酸與標靶蛋白質之表現。由此長期科技部計劃所獲得之研究成果，除可了解長鏈非編碼核糖核酸於全身性紅斑性狼瘡之致病機轉，且能找尋出潛在性之治療標靶。