人類心肌旋轉蛋白I檢測平台研發

  • 倪 子訓

學生論文: Master's Thesis

摘要

根據統計,心肌梗塞在全世界是死亡率最高的疾病,在台灣則是全國第二高。心肌梗塞的發生是由於供應心臟氧氣及養份的血管受到阻塞,使得血液沒有辦法流過,造成心肌細胞受損。當心臟受損時,會釋放出心肌旋轉蛋白-I (cTnI),是一種對心肌細胞受損時,具有非常優越的特異性和靈敏性的生物標記。現今檢測cTnI大多使用酵素免疫分析法(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA),因此對於檢測cTnI的抗體其靈敏性、特異性和穩定性顯得非常重要。至今已有?多廠商發展出檢測試劑套組或是cTnI的抗體,而對心肌梗塞的病患而言,早期診斷並把握治療的黃金時間是相當重要的。在本篇研究中,由先前實驗室所製作出來的人類全長cTnI重組蛋白(human full-length rcTnI)來免疫小鼠,利用融合瘤技術來生產cTnI抗體,並經過篩選及配對,得到一對的具高靈敏性和特異性的單株抗體,3B5和3B分別作為捕捉抗體及偵測抗體,並發展cTnI的檢測平台,建立我們的ELISA系統,目前對於cTnI的檢測,最低空白極限為0 0466 ng/mL,最低偵測極限為0 0862 ng/mL,10%變異係數在我們的測試中也都在10%以下。建立好的系統,經過不同條件的優化測試,我們嘗試把此系統進行批量製造、產品化,模擬市售的檢測試劑套組,並且確認我們抗體的穩定性和效價。同時,我們也建立冷光的ELISA系統來做比較,目的是希望可以增加檢測的靈敏性。在冷光ELISA系統,目前cTnI的最低空白極限為0 06 ng/mL,最低偵測極限為0 125 ng/mL,而10%變異係數在測試中則介於9%-12%之間。除此之外,我們嘗試發展更快速、方便的檢測方式,將cTnI的診斷建立在point-of-care (POC)的概念,所以利用膠體金與抗體鍵結,建立免疫層析試紙(lateral flow strip),目前在這方面,cTnI-T-C在血清及血漿檢體中分別可以偵測到0 5 ng/mL及5ng/mL,cTnI在兩種檢體中能偵測到的濃度皆為10 ng/mL。 關鍵詞:心肌梗塞、單株抗體、酵素免疫分析法、心肌旋轉蛋白I
獎項日期2016 八月 25
原文Chinese
監督員Trai-Ming Yeh (Supervisor)

引用此文

人類心肌旋轉蛋白I檢測平台研發
子訓, 倪. (Author). 2016 八月 25

學生論文: Master's Thesis