以表面增顯紅外光譜儀分析蛋白質在固體基板表面吸附狀況之研究

  • 李 柏慶

學生論文: Master's Thesis

摘要

本研究利用表面增顯紅外光譜儀(Surface-Enhanced Infrared Spectroscopy SEIRAS)結合循環伏安儀(Cyclic Voltammetry CV),即時觀測牛血清白蛋白(Bovine serum albumin BSA)在金電極表面的吸附行為,藉以探討六碳羧基(6-Mercaptohexanoic acid 6-MHA)、六碳烷基(1-Hexanethiol MCH)、六碳羥基(6-Mercapto-1-hexanol 6-MCH)與兩碳氨基(Cysteamine MEA),不同官能基硫醇修飾,與不同電位之金表面,對BSA的吸附影響,再以FTIR分析吸附於金表面之BSA的構型變化,推測其吸附情況。實驗結果顯示,其總吸附量排序為:6-MHA > MCH > 6-MCH > MEA,推測為帶負電的羧基基團會吸引BSA分子的吸附。接著利用循環伏安儀使金表面帶有不同的電位,結果在施加負電位時的總吸附量會高於施加正電位的情況。以FTIR分析BSA之二級結構,在溶液中的構型以?-helix為主,而吸附於金表面時會轉變為β-sheet為主,但當BSA吸附量增加形成多層吸附層時,分子的構型以?-helix為主。 在實驗的另一部分使用6-MHA修飾金電極後,以抗體(Anti-HDGF)與抗原(HDGF)組裝成無標記型免疫生醫感測器,在抗原濃度為0 5~4 ng/c c時,其誤差值約為? 2 5~4 4% (n=5)。將檢測下限降低到0 125 ng/c c時,檢量線以0 5 ng/c c為轉折點,在0 125~0 5 ng/c c的區間,電流密度與抗原濃度成正比,而在0 5~4 ng/c c的區間則成反比。以FTIR分析抗原之構型,發現隨著抗原濃度的增加,β-sheet與?-helix之比例逐漸相近,當抗原濃度高於轉折點0 5 ng/c c時,兩者之比例則越差越大。
獎項日期2014 八月 20
原文???core.languages.zh_ZH???
監督員Yuh-Lang Lee (Supervisor)

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