從多能性到血液內皮細胞非編碼轉錄組的敏感分析

  • 邱 語彤

Student thesis: Master's Thesis

Abstract

細胞中除了信使RNA (mRNA) 之外,非編碼RNA (ncRNA) 在細胞中也扮演重要的角色,其中miRNA的表達會調控細胞不同的?能之外,也會影響mRNA的穩定性及基因組 (genome) 的結構,目前有?多種方法可以用來偵測或分析細胞中的miRNA,如定量反轉錄聚合?鏈反應 (qRT-PCR)、基因晶片 (microarray) 以及次世代定序 (NGS),然而這些方法的敏感度並沒有很高,所以為全面了解不同細胞類型的?能及特徵,我們建立了敏感的偵測系統進行分析。我們透過多聚腺?酸化 (polyadenylation) 同時分析細胞中的mRNA及ncRNA,接著我們調整了buffer中的離子濃度,使偵測系統的靈敏度增加。我們將此系統應用於少量或單顆的HEK293細胞及人類多?能幹細胞 (hPSC),並以qRT-PCR及高通量定序來確認此系統的靈敏度。根據結果發現我們可以透過此系統觀察少量或單顆細胞中不同類型的RNA,最後透過qRT-PCR驗證HEK293細胞及hPSC細胞的選擇性富集,另外我們也發現此系統除了可以偵測miRNA之外,同時還可以分析其他ncRNA及mRNA。總而言之,我們建立了一個簡單且敏感的偵測系統,可以同時量化少量細胞數的ncRNA及mRNA。
Date of Award2017 八月 17
語言Chinese
SupervisorPo-Min Chiang (Supervisor)

引用此文

從多能性到血液內皮細胞非編碼轉錄組的敏感分析
語彤, 邱. (Author). 2017 八月 17

Student thesis: Master's Thesis