探討微小球蛋白(MSP58)調節核醣體基因轉錄的角色與鑑別其核定位及核仁定位序列

  • 楊 顓賓

學生論文: Master's Thesis

摘要

MSP58/MCRS1是一種核仁蛋白,過去被報導參與調控細胞增生、細胞轉形與老化的相關訊息傳遞途徑。在文獻中指出MSP58的蛋白質異形體MCRS2胺基酸序列上包含了N端一段核定位訊號 (nuclear localization signal NLS)與C端一段核仁定位訊號 (nucleolar localization signal NoLS)。我們利用酵母菌雙雜合篩選 (yeast two-hybrid screening)發現MSP58蛋白與importin ?1蛋白之間有交互作用,因此在我們的研究中想試圖確認MSP58的NLS與NoLS序列。利用點突變技術 (site-specific mutagenesis)與免疫螢光染色分析 (immunofluorescence analysis),我們發現了在MSP58胺基酸序列上有兩段NLS序列,分別在胺基酸32到56 (NLS1)與117到123 (NLS2) 位置,並且確認在這些序列上進行突變時會使MSP58蛋白無法進入細胞核中。更進一步發現在NLS1上包含調控蛋白質進入核仁的NoLS序列。接著我們研究發現在HT1080細胞中,MSP58序列上的核定位訊號NLS與核仁定位訊號NoLS對於抑制細胞增生與活化p53/p21訊息傳遞途徑扮演相當重要的角色。並且透過qRT-PCR與luciferase reporter assay實驗我們證實了MSP58會調控核醣體基因的轉錄活性。最後我們透過酵母菌雙雜合篩選發現了?多會與MSP58蛋白結合的核仁蛋白,並且驗證在細胞中MSP58蛋白會與這些核仁蛋白形成蛋白質複合體,進而參與調控核醣體基因的轉錄作用。
獎項日期2014 八月 29
原文Chinese
監督員Ding-Yen Lin (Supervisor)

引用此

探討微小球蛋白(MSP58)調節核醣體基因轉錄的角色與鑑別其核定位及核仁定位序列
顓賓, 楊. (Author). 2014 八月 29

學生論文: Master's Thesis