Establishing IRSp53S-inducible SW480 colorectal cancer cell lines and studying how IRSp53S affects cell proliferation in colon cancer cells

論文翻譯標題: 建立IRSp53S可調控式表達的大腸癌細胞株SW480以研究IRSp53S如何對大腸癌細胞生長的影響
  • 王 毓華

學生論文: Doctoral Thesis

摘要

在人類的大腸直腸癌中,除了epidermal growth factor receptor (EGFR),其下游的受體EGFR pathway substrate number 8 (Eps8)也有過度表現的情況。Eps8的過度表現會促進Src以及FAK kinase的活性,進而去促進癌細胞的生長以及爬行能力。Insulin Receptor tyrosine kinase Substrate Protein of 53 kDa (IRSp53)是一種adaptor蛋白,他可以連結 Rho-family small GTPases 例如Rac 和Cdc42,進而去促進肌動蛋白細胞骨架重組。在我們過去的研究中發現Eps8-IRSp53S複合物參與了v-Src介導的腫瘤發生。為了證實Eps8-IRSp53之間的相互作用在人類大腸直腸癌中的重要性,我們建立了在SW480細胞中同時表達Eps8和IRSp53S的細胞。而SW480與其相對應的轉移的SW620細胞相比,SW480細胞的Eps8以及IRSp53S蛋白質表現都來的較少。不幸的是,我們並無法在SW480細胞中獲得同時表達Eps8和IRSp53的細胞株,我們推測可能是在SW480細胞中同時表達Eps8和IRSp53會造成細胞生長停滯或凋亡。為了研究和證實這個現象,我們首先建立了Tet-Off control和Tet-Off調控的IRSp53S-expressing 的SW480細胞。當我們將IRSp53S-inducible細胞轉染EGFP或EGFP-Eps8的質體DNA時,我們發現IRSp53S/EGFP-Eps8-overexpressing細胞會有染色質濃縮的現象,而IRSp53S/EGFP-expressing或IRSp53S/EGFP-Eps8 overexpressing加doxycycline的細胞則沒有這個現象。我們也在MTT試驗中看到同時表達Eps8及IRSp53S的調控式細胞會降低細胞生存率。在使用流式細胞儀研究中我們也發現同時表達Eps8及IRSp53S的細胞會增加G1 phase以及減少S phase的細胞比例,進而延遲細胞週期的進展。然而,在我們初步的異種移植動物實驗的結果,由於細胞株同時真正表達Eps8與IRSp53S的細胞比例非常的低(低於10%),這些細胞所產生的腫瘤大小和IRSp53S-expressing cells或是表達質體控制組的SW480細胞所產生的腫瘤相比,在統計分析上並沒有差異。我們的結果顯示IRSp53S-Eps8相互作用可能在調節結腸癌進展中發揮獨特作用而值得進一步研究。
獎項日期2019
原文English
監督員Tzeng-Horng Leu (Supervisor)

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