蛋白磷酸?2A型 (簡稱PP2A) 是主要的絲氨酸/蘇氨酸磷酸?之一，並在真核細胞中廣泛表達。PP2A由三個次單元所組成，包含結構性次單元A，催化性次單元C，以及決定受質特異性和細胞座落位置的調節性次單元B。B調節次單元可以分為四個家族，B (B55 / PR55)，B' (B56 / PR61)，B' (PR72 / PR130)和B' (PR93 / SG2NA)。我目前的研究重點是屬於B (B55 / PR55)家族的B55δ，B55δ除了在調節有絲分裂的進入和出離發揮關鍵作用外，最近研究也顯示出B55δ在調節腫瘤中浸潤性T細胞的存活和生長扮演負面角色。STOML2是一種粒線體蛋白，也稱為SLP-2和paratarg-7，可調節粒線體的生合成。STOML2的表達在多種癌症中是高度表現的，並會促進腫瘤細胞的腫瘤發生、轉移和侵襲。另外，STOML2在調節T細胞受體信號傳導和T細胞活化中也具重要作用。已知PP2A-B55δ完全?會去磷酸化STOML2，而PP2A-B55δ和STOML2之間相互作用失調是漿細胞疾病的標誌之一。重要的是，PP2A-B55δ在調節STOML2的磷酸化中的?能作用在很大程度上是未知的。 我們首先研究B55δ在調節STOML2的蛋白質和磷酸化水平中所扮演的角色。 在一般恆定狀態下或血清刺激後的HeLa及Jurkat細胞中，B55δ穩定降低表現或過度表達對STOML2的表現沒有顯著影響。Phos-tagTM SDS-PAGE分析的結果顯示當B55δ穩定降低表現時會增加磷酸化形式的STOML2表現。此外，利用共同表達PKC ζ及用PKC ζ活化劑PMA處理，我們確認了受PKC ζ催化磷酸化後的STOML2在Phos-tagTM SDS-PAGE分析呈現的異構型分子，而且我們也發現PKC ζ催化磷酸化的STOML2分子會選擇性地被B55δ調降，而不是透過B56γ3。為了研究B55δ調控STOML2對粒線體的生物性?能，我們透過高解析率螢光顯微鏡研究了粒線體相對數量和STOML2在細胞中的分佈。結果顯示STOML2增加了粒線體的量，但共同表現B55δ或B56γ3時則降低了STOML2對粒線體量的增強作用。此外，我們發現內生性及外生性STOML2皆呈點狀分佈，但當B55δ或B56γ3過度表達時，造成外生性STOML2則形成細胞質中的聚集體。透過共定位分析，B55δ的過度表達會輕微影響內生性STOML2的座落位置，但過度表現B55δ或B56γ3會嚴重地破壞外生性STOML2在粒線體座落位置。 綜合以上，我們的結果顯示在HeLa和Jurkat細胞中，無論是穩定狀態還是血清刺激下B55δ的過度表達或降低表現皆對STOML2的表現沒有顯著影響。在磷酸化調節中，B55δ是主要調降PKC ζ誘導的STOML2磷酸化。此外，B55δ及B56γ3皆減少了STOML2對粒線體數量的增強作用並干擾外生性STOML2的粒線體分佈。
Investigate the Role of the B55δ Regulatory Subunit of Protein Phosphatase 2A in Regulating Phosphorylation and Activities of STOML2
庭?, 楊. (Author). 2019
學生論文: Doctoral Thesis