腫瘤壞死因子-? (Tumor necrosis factor-? TNF-?) 是一種先天性免疫反應中的多效型細胞激素。而相較於哺乳類的 TNF-? 研究，硬骨魚類較缺乏，先前研究已在點帶石斑魚中發現兩種 TNF-?，並分別將其命名為 grouper TNF-?1 以及 grouper TNF-?2，兩者的胺基酸序列相似度為 35 6%，在硬骨魚類親緣關係比較中，屬兩個不同的 TNF-? 族群，且與哺乳類的差異約在 26%。而兩物種之間的 TNF-? 是否存在?能以及結構上的差異，仍需進一步的證實。在本研究中以大腸桿菌作為表現系統，且以親和性層析法純化石斑魚重組 TNF-?1 (rgTNF-?1) 及 rgTNF-?2。藉由膠體過濾層析分析發現兩者主要的分子量大小可能為三聚體。接著，在結構分析中，以 X-ray 晶體繞射實驗解析出解析度約 4 0 ? 的 rgTNF?2 晶體結構，並顯示其為單體環狀排列之三聚體構型，分別與人類及小鼠的 TNF-? 結構有高度相似性。另以小角度散射實驗確認 rgTNF-?2 在水溶液中的分子大小與形狀也呈現三聚體之構型，與晶體繞射實驗之結果相似。本研究以 rgTNF-?2 作為模板，模擬 rgTNF-?1 的蛋白質結構，並且結合跨物種之 TNF-? 的胺基酸序列比對結果發現，有些具有高度保守性的胺基酸，大多位在 Jelly-roll motif 的位置，由此可見，不同物種的 TNF-? 可能是以相同胺基酸維持它們具有的三聚體構造。
Structural Analysis of Two Types of Tumor Necrosis Factor-? from Orange-spotted Grouper (Epinephelus coioides)
敏, 游. (Author). 2019
學生論文: Doctoral Thesis