USP24透過活化NF-κB訊息傳遞途徑來調控癌轉移相關基因的表現

  • 周 正達

學生論文: Master's Thesis

摘要

癌症為國人十大死因之首已為期多年,根據國民健康署的統計資料中這些因為癌症去逝的病患又有接近五分之一的人是死於肺癌,因此更加凸顯了對於肺癌的研究重要性。近年來我們實驗室發現泛素特異蛋白脢二十四 (Ubiquitin specific peptidase 24 USP24) 參與了調控腫瘤生成以及癌症的轉移等現象,然而對於其詳細的機制尚未釐清。NF-κB是細胞中很常見的轉錄因子,根據先前的研究顯示它調控發炎、免疫反應、細胞存活與細胞生長等生理現象。此外先前的研究顯示NF-κB訊息傳遞途徑可以調控USP24的轉錄,因此我們想反過來觀察USP24能不能反過來影響NF-κB訊息傳遞途徑本身,所以我們先靜默USP24後發現NF-κB的抑制子IκB的量有明顯的上升而NF-κB本身則沒有明顯的變化,我們更進一步的去確認在靜默USP24後IκB的蛋白質穩定性有所上升而泛素化修飾的程度則有明顯的下降,由於USP24是進行去泛素化與前面看到的結果正好相反,所以我們在靜默USP24後再去觀察IκB的泛素化連接脢β-TrCP是否會因為USP24的靜默有所變化,我們發現β-TrCP蛋白的量在靜默USP24後有明顯的下降而β-TrCP的蛋白質穩定性也有所下降,接著我們利用免疫沈澱的方式發現USP24確實能與β-TrCP有交互作用後再接著觀察到靜默USP24後β-TrCP的泛素化修飾程度有所上升而大量表現USP24時β-TrCP的泛素化修飾則有所下降,接下來為了觀察USP24是否會影響NF-κB的?能,因此我們先利用免疫螢光來觀察在大量表現USP24後NF-κB的入核情形並發現NF-κB的入核有明顯的上升,接著利用報導基因偵測的方式分別觀察大量表現以及靜默USP24後NF-κB的活性差異,結果發現NF-κB的活性會因為大量表現USP24增加而因為靜默USP24下降,綜合這些結果我們可以知道USP24除了先前的報導會受NF-κB調控外,還可以藉由調控β-TrCP反過來影響NF-κB本身的訊息傳遞。接著我們將實驗室先前有無靜默USP24的microarray中表現量有明顯變化的基因與已知受NF-κB調控的452個基因比對,發現靜默USP24後表現量上升的125個基因中有3個受NF-κB調控,而靜默USP24後表現量上升的251個基因中有22個受NF-κB調控,其中在這些因為靜默USP24後表現量有下降的基因裡我們發先有7個已知與癌轉移相關的基因,加上先前實驗室發現USP24會參與調控癌轉移,我們可以合理推斷USP24很可能是透過影響NF-κB訊息傳遞途徑來調控癌轉移的發生。
獎項日期2018 七月 30
原文???core.languages.zh_ZH???
監督員Jan-Jong Hung (Supervisor)

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